银河娱乐网页版网页版 银杏叶提取物的制备及质量控制研究现状

       银杏叶提取物（GBE）是银杏科植物银杏的干燥叶经加工制成的提取物，化学成分复杂。目前已从中分离到黄酮类化合物、萜类内酯、、聚戊烯醇类、有机酸类等共计160余种化合物。其中黄酮类化合物和萜类内酯是GBE及其制剂质量控制的常规指标，也是GBE的主要活性成分，其能改善心脑血管微循环、清除氧自由基，在高血压、动脉硬化、急性脑梗死等心脑血管疾病治疗方面疗效较好。以GBE为原料加工制成的银杏叶片、胶囊和滴丸等制剂是目前在欧美非常受欢迎的食用增补剂和药品。

       GBE的化学成分

       黄酮类化合物：主要包括黄酮及其苷、双黄酮、黄酮醇及其苷、花色素等，其含量为2.5%~5.91%。黄酮类化合物有很强的抗氧活性，能清除氧自由基，防止脂质过氧化，其中的槲皮素、山萘酚及异鼠李素还可升高血管内皮细胞内Ca2+浓度，促进NO的合成和释放，从而舒张血管、改善心脑血管循环。

       萜类内酯：共8个，根据结构分为二萜类的银杏内酯和倍半萜类的白果内酯。银杏内酯包括银杏内酯A、B、C、J、K、L、M，具有抗血小板激活因子活性。萜类内酯涉及超氧阴离子清除过程，能保护细胞膜结构，可用于中风、老年痴呆症等疾病治疗。银杏萜类内酯的分离与质量控制已成为目前国内外研究的热点。

       聚戊烯醇类：目前仅在银杏叶中发现，是由10~20个异戊烯基单元线性连接和末端异戊烯醇结构的长链化合物，包含顺式和反式结构，药用开发前景广阔。

       其它有效成分：银杏提取物中还含有多糖、酚类、有机酸类、氨基酸、微量元素等。

       GBE的制备方法

       有机溶剂提取法：该法在生产中应用最广泛，溶剂主要为乙醇-水溶液或丙酮-水溶液。通过将银杏叶干燥粉碎、浸泡萃取、过滤蒸馏等，得到银杏叶粗提物。在此基础上，继续采用液-液萃取、沉淀、吸附洗脱等流程可得银杏叶精提物，该法工艺复杂、耗时长且产率低，产品中的残留溶剂会影响产品质量。近年来树脂吸附纯化法越来越多的被应用在银杏叶提取工艺中，有研究发现所采用的吸附树脂类型和工艺不同，黄酮醇苷和内酯都有很好的收率，且各有特点。有研究以银杏黄酮的吸附性能为指标，筛选10种大孔树脂发现，AB-8树脂吸附性能优良，吸附量为102.8mg/g，解析率为97.9%。树脂吸附法生产工艺具有残留有机溶剂少、成本低、回收率高的优点，在GBE及制剂的制备和生产方面发展前景广阔。

       超临界流体提取法：相较于有机溶剂提取法，该法具有安全无毒、无溶剂残留，活性成分及易挥发、热敏性成分损失少、提取效率高等优点。通过调控临界温度和压力、改变改性剂的种类和用量，还可以选择性的进行目标物萃取和分离纯化。有研究建立了一套超临界CO2萃取小试、中试装置，并确定了最优的实验参数进行银杏叶活性成分提取，得到的GBE中黄酮类和萜类内酯的含量均高于国际标准，分别为28%、7.2%。目前超临界流体提取技术在中药活性成分提取的应用越来越广泛 。

       高速逆流色谱技术提取法：是一种基于液-液分配原理、不需固定载体的新型色谱技术，其溶剂体系范围广、分离效率高、制备量大，非常适合中药提取物的制备性分离。目前该技术已经开始应用于分离银杏叶中黄酮类化合物、萜类内酯及银杏酸等，将成为制备银杏黄酮类和萜类内酯的较佳手段。

       GBE的质量控制

       黄酮和萜类内酯一直是银杏叶及其制剂质量控制的热点。

       总黄酮醇苷：

       总黄酮醇苷是国际公认的银杏叶及其制剂的质量控制指标。银杏黄酮成分复杂，主要以黄酮苷的形式存在，难以对含量进行直接测定。目前国内外标准中，通常先对样品进行酸解，然后采用高效液相色谱法（HPLC）测定槲皮素、山 奈 素、异鼠李素的含量，再乘以校正系数来间接反映总黄酮醇苷含量，这种检测方法不能全面准确的反映产品的信息，在识假、辨假方面不足，有必要直接测定黄酮原形。有报道利用UPLC-MS/MS直接测定GBE中10个黄酮类成分原型，发现总黄酮含量在不同批次GBE中差异较大，为89.29mg/kg~114.18mg/kg，不同黄酮类成分在同一批次含量差异也较大，该方法可作为黄酮类成分质量控制的一个补充。

       萜类内酯：

       GBE的萜类内酯化合物主要包括银杏内酯A（GA）、银杏内酯B（GB）、银杏内酯C（GC）和白果内酯（BB）。萜类内酯的紫外吸收较弱，国内外标准中通过反复萃取制备供试品溶液，采用HPLC-ELSD/RID法测定GA、GB、GC和BB含量。《中国药典》2020年版（Chp2020）规定了四种成分的总含量限度，国外药典GBE标准除规定总含量外，还对BB、GA+GB+GC含量范围进行限制。有报道用HPLC-ELSD法对6个不同厂家的GBE中萜类内酯含量检测发现，大多数厂家虽然四个成分的总含量（5.86%~8.41%）符合中国药典标准，但是BB含量（1.78%~2.92%）、GA+GB+GC总含量（4.62%~6.39%）并未达到英美药典要求。因此各GBE厂家有必要参考国外药典，对产品进行更严格的质量控制，保证产品质量。

       不可忽视的**物质-银杏酸

       银杏酸主要为烷基酚酸类化合物，有致敏性、细胞**、胚胎**及神经**等，是GBE及其制剂中的需严格控制的组分。国内外标准均采用HPLC法测定总银杏酸的含量。目前Chp2020将银杏酸限度标准由10mg/kg修订为5mg/kg，与国外标准一致。

       值得注意的是，Chp2020新增了指纹图谱的检测项，在乙腈-磷酸体系中以HPLC检测GBE指纹图谱，以芦丁定位，与银杏叶对照提取物指纹图谱中的17个色谱峰比对，全峰匹配，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，相似度应≥0.90。此次修订有利于提高国内GBE的产品质量。

       银杏及其制剂在国际市场上非常热销，其质量控制也越来越到重视。目前我国GBE生产厂家很多均遵循《中国药典》要求进行产品检测，很少有厂家按照欧、美等国药典限度要求进行质控。这样导致我国虽然银杏资源丰富，但产品质量不能达到欧美等国家质量要求而很少出口到这些国家，国产GBE大部分只能向低质量标准国家出口，国际竞争力弱。因此，在原料及工艺方面，国内GBE厂家应加强银杏叶原料质量控制，采用高效提取工艺进行生产，并建立标准化的生产流程。在质量控制方面，目前，Chp2020仅规定了总黄酮醇苷和萜类内酯的含量下限，建议国内厂家应参考国际药典标准，制定合理的总黄酮醇苷和萜类内酯含量范围。此外，还应考虑增加萜类内酯中BB含量范围和GA+GB+GC总含量范围，制定出比中国药典更严格的企业标准，从整体上提升产品质量，对于开拓欧美GBE市场有重要意义。

       参考文献：

       [1]李明飞,王成章. 银杏叶提取物制备、检测及应用研究进展[J]. 现代化工,2020,40(01):29-32.

       [2]唐溱,姜典卓,赵晓霞,张永文. 银杏叶提取物质量标准比较及标准提高思路探讨[J]. 中国药品标准,2020,21(01):21-25.

       作者简介：沙罗，中药研发工作者，中药学硕士，现就职于国内某大型药物研发公司，致力于中药新药的研究开发。