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       7月30日，深圳细胞谷宣布其联合北大深研院近期发表了双特异性CAR-T高水平文章，深圳细胞谷研发部部长赵丽君博士以第一作者、北京大学深圳研究生院曹宇教授为通讯作者，在国际知名期刊Protein & Cell（SCI一区期刊，影响因子13.6）上发表论文“A novel loop-structure-based bispecific CAR that targets CD19 and CD22 with enhanced therapeutic efficacy against B-cell malignances”。  

       嵌合抗原受体T（CAR-T）细胞疗法在治疗B细胞恶性肿瘤领域已取得显著成效，但部分患者仍面临复发问题。为解决抗原逃逸及抗原表达的异质性，研究者们设计了多种形式的识别双重或多种抗原的CAR构建体以降低复发率，然而近年来报道的几乎所有CD19/CD22双特异性CAR都存在CD22靶向不足的问题，这是由CD19抗体和CD22抗体的空间构型引起的。 

       大多数报道的CD19/CD22 CAR-T细胞在CD19刺激下保持强烈的反应，但在CD22介导的活性下表现出较低的效力。考虑到scFv聚集引起的潜在tonic信号，我们提出了一种新的CD19/CD22双特异性结构（CD19/CD22 LoopCAR-1），用CD22纳米抗体取代CD22 scFv。与已经上临床的LoopCAR-4或其他环状结构CD19/CD22 CAR相比，CD19/CD22 LoopCAR-1表现出更好的CD22重定向活性，这表明LoopCAR-1可能提供了几何上最优的免疫突触（IS)，并展现出有效的双重特异性和突出的抗白血病活性。这种新颖的结构设计为使用带有纳米抗体和scFv进行环状结构设计提供了独特的思路，并可能将CAR-T细胞治疗的范围扩展到实体肿瘤，以及癌症以外的适应症。

       首先，研究人员分别采用了G4S Linker、Long Hinge Lama Linker和β-Stranded Loop Linker构建了三种不同形式的CD19/CD22 CAR，分别命名为TanCAR-1、TanCAR-2和LoopCAR-1。经验证，LoopCAR-1不仅显著增强CAR-T对B-ALL患者细胞的杀伤活性，也显著提高了细胞因子释放水平并促进细胞增殖。这些结果表明，环状结构可能是双特异性CD19/CD22 CAR的最佳设计。

       基于此环状结构，研究人员通过替换Linker和CD22纳米抗体，进一步设计了CD19/CD22环状CAR结构。

       在四种结构中，LoopCAR-1和LoopCAR-2对Nalm6和Nalm6 KO19细胞的影响尤为显著。经过两轮靶细胞刺激后，所有结构的CAR-T都表现出相当的细胞毒性，而LoopCAR-1比其他双特异性CARs具有更持久的细胞杀伤活性。此外，我们观察到LoopCAR-1再刺激后效应T细胞群增加，但耗尽标志物的表达减少，这表明LoopCAR-1对CD19抗原丢失的靶细胞具有持续的抗肿瘤活性。以上结果显示了抗体和Linker的选择在CAR结构设计中的关键作用，LoopCAR-1是最佳的CD19/CD22双特异性CAR结构。

       为了评估其体内的抗肿瘤效果，研究人员使用Nalm6细胞（CD19+CD22+）构建异种移植小鼠白血病模型测试各CAR-T细胞的疗效。结果显示，接受LoopCAR-1处理的小鼠体重未下降，且存活时间显著延长。此外，这些小鼠的血清细胞因子水平高于接受CD19 CAR、CD22 CAR或单靶点CAR-T联合治疗组。这些结果表明，LoopCAR-1在体内对CD19+CD22+肿瘤具有强效杀伤作用。 

       而后，研究人员进一步评估了LoopCAR-1在CD19或CD22敲除的免疫逃逸模型（1:1比例）和拟临床复发模型（1:1:1比例）中的表现，结果显示LoopCAR-1能显著抑制肿瘤生长，延缓疾病进展，延长生存期，提高血清细胞因子水平，且未引起体重下降。然而，与LoopCAR-1相比，LoopCAR-4和单靶点CAR-T细胞联合治疗组在减少肿瘤负荷方面表现不佳。这强调了LoopCAR-1结构的优越性。综上所述，针对白血病，LoopCAR-1结构的双靶点CAR-T发挥了最佳疗效，防止了免疫逃逸和与单特异性治疗相关的肿瘤复发。  

       最后，研究人员评估了CAR-T细胞治疗对临床相关的B-ALL PDX模型的疗效。结果展示，尽管使用环状CAR或单靶点CAR联合治疗的小鼠均无法完全根除原代B-ALL细胞，但与其他CAR-T细胞疗法相比，LoopCAR-1治疗组在后期仍具有较强的抗白血病活性、更高的总存活率和更多的Th1细胞因子的产生。此外，复发后白血病细胞保持了CD19和CD22的表达，排除了CAR应激介导的抗原丢失。这些结果表明，LoopCAR-1对B-ALL PDX模型具有稳定的治疗效果，揭示其是一种很有前途的临床治疗候选药物。  

       综上所述，本研究开发了一种新型双特异性CD19/CD22 LoopCAR-T，相较于其他环状CD19/CD22 CAR，该结构在增强CD22重定向信号传导方面展现出显著优势。通过与已进入临床的CAR-T细胞或单靶点CAR-T细胞联合治疗组的对比，强调了双特异性CAR-T细胞结构设计和优化的重要性。对于表达CD19及或CD22的B-ALL或淋巴瘤患者，LoopCAR-1展现出了更持久的临床治疗价值。目前该新型双特异性CD19/CD22 LoopCAR-T已由深圳细胞谷制备并应用于临床，已在华中科技大学协和深圳医院（南山医院）进行4例B细胞恶性肿瘤患者的临床治疗，效果显著。