银河娱乐网页版彩票 Tubulysin关键三肽制备工艺优化：助力新型药物开发

       Tubulysin类天然产物是从粘细菌种分离出来的微管去稳定毒 性肽。由于该类天然产物具有显著的细胞毒 性，药物化学研究人员一直致力于研究该家族分子的结构-活性关系（SAR）和药物开发，特别是将该类分子做为有效载荷用于新型抗体偶联药物（ADC）的开发。为了使该类分子在结构上更有利于ADC药物的开发，研究人员成功设计简单、可扩展的灵活三肽1（图1）。为了满足三肽化合物1的应用需求，工艺研究人员最近对该化合物的制备工艺开展了进一步探索。

       图1 三肽1结构

       如图1所示，三肽1基本结构单元包括1个N-甲基-D-高脯氨酸（Mep），1个异亮氨酸（Ile）和1个管式缬氨酸（Tuv）。虽然Ellman、 Nicolaou、Wipf等诸多研究人员对该分子的合成进行了大量的探索，但鲜有工艺路线适合其大规模制备。

       图2 三肽1的逆合成分析

       为了更好的合成三肽1，研究人员首相对其进行了逆合成分析。如图2所示，研究人员首先根据Noyori不对称还原，将三肽1逆推至化合物酮2；酮2可以由化合物4通过选择性氢硅烷化得到中间体3，然后3通过Tamao?Fleming氧化得到；片段4可以切断为化合物5、6和可商业化购买的原料7。研究人员指出，从正向合成意义上来将，使用炔做为酮的替代物，可以别面强碱性和亲核反应中产生过多副反应。

       图3 三肽1的合成

       根据逆合成分析，研究人员对三肽1进行了合成（图3）。Mep-Ile片段10可以由D-高脯氨酸和异亮氨酸苄酯在EDAC/HOBt这一简单的条件下缩合后，再将二肽进行Pd/C催化氢化反应，去除苄基，即可得到。需要指出的是，研究人员采用该保护和去保护策略，是为了减少中间体10在水洗后处理过程中的损失。

       丙胺6的制备路线较短，以酸催化异丁醛（12）与(S)-Ellman辅剂13缩合，以PPTS/硫酸钠为缩合剂，得到油性亚胺14，分离产率为89%。接着，亚胺14与三异丙基硅基乙炔（TIPS-acetylene）在强碱n-BuLi条件下发生亲核进攻，得到的Li盐化合物与溴丙烷反应即可得到中间体6。研究人员指出，这是一种非常高效、方便的单瓶、三组分耦合的反应策略，值得进一步探讨。首先，在最初C?C键形成过程中，需要甲苯/THF混合溶剂，因为使用甲苯作为唯一的反应溶剂会导致炔基化反应非常缓慢，而单独使用THF会导致较低的非对映选择性。其次，在N-丙基化反应中也观察到类似的明显的溶剂效应：如果没有添加过量的DMF，即使使用1-碘丙烷，也不能成功实现烷基化。在烷基化阶段使用DMF的逻辑在于，DMF可以使混合溶剂极性增加，且能够分解亲核有机金属低聚物，这两种特性都有利于促进双分子亲核取代反应。最后，使用原为生成的HCl脱除亚磺酰胺，得到盐酸盐6·HCl，分离收率为92%，e.r为99.5：0.5。

       成功得到中间体10和中间体6后，研究人员对该中间体的缩合进行了探索。正如预期，使用普通偶联试剂如HATU、PyBrop和EDAC的初始尝试没有成功，目标酰胺15形成了不到3%。于是，研究人员尝试了路易斯酸活化胺的条件，发现在Et2AlCl催化下，可以在保证极少消旋化（8:1）的前提下以75%的产率得到目标化合物15。接下来，中间体15脱去TIPS保护得到炔烃化合物16；化合物16与原料7偶联得到化合物4；然后将炔烃转化为酮羰基，即得到前体化合物2；最后，前体化合物2通过Noyori不对称还原即可得到目标产物1。

       研究人员指出，优化后的工艺，通过8步反应，仅一步需要色谱柱纯化，总产率为22.4%，这些指标均优于现有工艺路线。这为三肽1进一步用于药物开发提供了强有力的保障！

       参考文献：

       1. Stereoselective Synthesis of a Tubulysin Core for Antibody?Drug Conjugate Studies, Org. Process Res. Dev. 2022, 26, 2138?2144