医麦客新闻 eMedClub News

       CD19 CAR-T细胞疗法推动了血液瘤肿瘤治疗范式的转变，不过由于抗原逃逸和低持久性，仍有一部分患者在治疗后复发，同时，降低成本也是基于病毒载体CAR-T细胞疗法的一个重要挑战。一篇名为“Manufacturing CD20/CD19-targeted iCasp9 regulatable CAR-TSCM cells using a Quantum pBac-based CAR-T engineering system”的文章报道了利用基于piggyBac转座子的载体 Quantum pBac（qPB），开发了一种无病毒的细胞工程系统，用于开发和生产多重CAR-T疗法。

       研究人员将携带iCasp9、CD20scFv和CD19scFv的转座子微环和qPBase质粒递送到激活的T细胞中，同时使用无血清CAR-T细胞培养补充物Quantum Booster（qBT），促进CAR-T细胞的增殖，同时保持干细胞，提升了CD4+和CD8+T细胞群体中CD45RA+CD62L+CD95+TSCM细胞的高百分比。基于此产生的，包含识别CD20和CD19的结合域以及由EFlu启动子驱动的iCasp9自杀基因的CARiC9-20/19 CAR-T细胞。在小鼠模型中，CARiC9-20/19 CAR-T细胞显示出增强的抗肿瘤效果，且可通过iCasp9自杀基因安全控制，小鼠的存活时间显著延长，特别是在高剂量组中，CAR-T细胞的治疗导致肿瘤完全清除，并且小鼠在整个试验期间均未复发。

       研究者进一步在NCI-N87胃癌模型中评估了qPB系统生产的CAR-T细胞的抗肿瘤效果，与对照组相比，qPB系统生产的CAR-T细胞显著抑制了肿瘤的生长，并在试验的第17天实现了肿瘤的完全清除。而使用病毒载体（如慢病毒）生产的CAR-T细胞在相同条件下未能完全清除肿瘤。

       整体而言，本研究展示了利用qPB系统制造CAR-TSCM细胞的可行性，这为生成高效、持久的CAR-T细胞疗法提供了一种新的策略。不过这一研究也存在一些局限性，仅在有限的小鼠模型中进行了体内实验，未来的研究需要在更大规模的动物模型以及人类临床试验中进一步验证CAR-T SCM细胞的疗效和安全性。

       这一研究报告的亮点主要是在于利用了非病毒载体手段，并结合了双靶点能够有效避免肿瘤逃逸，同时加入了自杀基因，进一步增强了该候选产品的安全性。对CAR-T细胞疗法的多样化改造一直是业内努力的方向。近日，同样是利用非病毒手段改造CAR-T的企业Cellectis在Molecular Therapy上发表了一篇文章，展示了TALEN介导的基因编辑的能力，以设计双CAR靶向CAR-T细胞疗法。

▲ TALEN（图片来源：官网）

       TALEN是基于一类衍生自转录激活子样效应物（TALE）的蛋白质，TALE是一种高度特异性的DNA结合蛋白，具有33或34个氨基酸重复序列。除了氨基酸位置12和13处的重复可变二残基（RVD）外，每个重复都是高度保守的。RVD决定了TALE将结合的DNA序列。TALE重复序列和相应的DNA序列之间简单的一一对应关系使得组装重复序列以识别新的DNA序列的过程变得简单。

       这些TALE可以与DNA核酸酶FokI的催化结构域融合，产生转录激活剂样效应核酸酶（TALEN）。由此产生的TALEN构建体具有高特异性和高活性，有效地产生了工程序列特异性核酸酶，仅在预先选择的位点结合和切割DNA序列。与CRISPR/Cas9不同，TALEN可以靶向基因组内任何需要的序列，无PAM位点限制，且精确简单。

       Cellectis提出了一种创新的CAR-T细胞工程策略——同种异体“Smart CAR-T”，能够表达组成型CAR，靶向实体瘤中的成纤维细胞激活蛋白（FAP），FAP在大多数成人组织中的表达量较低，主要表达于间质中的癌症相关成纤维细胞（CAF）细胞，也在一些肿瘤细胞如肉瘤、间皮瘤和食管等上皮性肿瘤中表达。同时，在TCR信号诱导基因座（如 PDCD1）处特异性表达肿瘤相关抗原（TAA） ，如间皮素。FAP CAR介导的CAF靶向诱导间皮素CAR的表达，建立对双抗原感应敏感的IF/THEN门控回路。该细胞可有效靶向免疫治疗顽固性实体瘤，同时降低潜在的安全风险。

▲ 同种异体“Smart CAR-T”（图片来源：参考资料2）

       值得一提的是，Cellectis还开发了多款同种异体细胞疗法。UCART22是基于基因编辑技术TALEN和Cellectis开创性的电穿孔系统PulseAgile开发的同种异体基因编辑CAR-T疗法，靶向CD22（90%以上的B-ALL患者细胞能够表达CD22）。据公司官方称，UCART22是目前开发用于治疗R/R B-ALL的疗法中先进的同种异体CAR-T疗法。目前，该候选产品已经完成首例患者给药，正在进行1期临床试验。

▲ 在研管线（图片来源：官网）

       UCART123是同种异体的基因编辑CAR-T疗法，靶向CD123，其利用TALEN敲除了TCRαβ，最大限度了地减少了GvHD发生的可能性，用于治疗AML。此前公布的数据显示，在15名患者中有4名患者观察到了UCART123抗肿瘤活性的证据，有25%的患者获得有意义的反应。目前，该候选产品正在处于临床1期研究阶段。

       这家企业还获得了阿斯利康的青睐，将共同合作加速多达10项的下一代细胞与基因疗法开发，将主要专注于医疗需求显著未得到满足的领域，包括肿瘤、免疫学和罕见病等领域。根据协议，Cellectis将可能获得高达2.45亿美元款项。

       通过非病毒载体如Quantum pBac系统和TALEN基因编辑技术，加之双靶点、双CAR设计，科学家们正在不断推动CAR-T细胞疗法的前沿发展，不仅有望提高治疗效率与持久性，还增强了安全性与灵活性。

       未来，随着更多体内外实验及临床研究的深入，我们有望看到这些新型CAR-T细胞疗法在更大规模的患者群体中验证其疗效与安全性。同时，随着技术的不断成熟与成本的进一步降低，CAR-T细胞疗法将更加普及，惠及更多患者。此外，与大型药企如阿斯利康的合作，将加速这些创新疗法的研发与商业化进程，推动整个细胞与基因治疗领域的快速发展，为解决当前医疗领域未满足的需求提供强有力的支持。